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长片段DNA快速高保真PCR MasterMix(含红色示踪染料)包含Long-HiFi DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。Long-HiFi DNA Polymerase为多种采用最先进基因工程改造而来的超保真酶添加延伸因子混合而成，极大的提高了扩增长度、扩增速度、保真性和产量。Long-HiFi PCR MasterMix是长片段超保真快速扩增的首选产品。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。

• 扩增速度快：延伸速度可以达到3～4kb/min，是pfu的6～8倍。
  
• 扩增产量高：一般PCR产物量比传统pfu产量高50%～100%。
  
• 优异保真性：保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变菌落。
  
• 扩增长度长：以复杂基因组DNA为模板适合扩增不超过10kb左右的产物，以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过15kb左右的产物。

• Long-HiFi DNA Polymerase扩增速度快，质粒和简单基因组等简单模板可以采用10～15秒/kb；复杂模板如人类基因组可以采用20～25秒/kb。
  
• 如果电泳发现主带上下拖尾模糊现象，或者泳道出现从上样孔拖下来的涂抹带现象，一般提示延伸时间过
  长，梯度缩短延伸时间（建议10～15秒/kb为梯度减少延伸时间）直到获得满意结果。
  
• 对于GC含量很高的模板，预变性和变性温度可以提高到98℃。Long-HiFi DNA Polymerase耐热性强，98℃对Long-HiFi DNA Polymerase的活性无改变。
  
• 如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%～8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）。

• 建议PCR体系：
  

  成分	25μL体系	50μL体系	终浓度
  2×Long-HiFi PCR MasterMix	12.5μL	25μL	1×
  Forward Primer(10μM)	0.5μL	1μL	0.2μM
  Reverse Primer(10μM)	0.5μL	1μL	0.2μM
  Template DNA	as required	as required	-
  ddH2O	至25μL	至50μL	-

  
  参考模板用量（50μL反应体系）：
  质粒：0.1～10ng；细菌基因组：10～100ng；人类基因组：50～150ng；cDNA：1～5μL RT反应产物。
  
• 建议PCR循环条件：
  

  阶段	温度	时间	循环数
  预变性	95℃	3min	1
  变性	95℃	10sec	30
  退火	55℃	10～15sec
  延伸	72℃	15～20sec/kb
  最后延伸	72℃	2～5min	1
  -	4～8℃	Hold	-